1、色譜柱的底部和上部裝石英石的目的

   底部：防止硅膠順著活塞口流下來(lái) 上部：防止加溶劑的時(shí)候，將上層硅膠面沖散，導(dǎo)致分離不均勻

2、SephadexG-200柱層析是什么

   SephadexG Sephadex是葡聚糖凝膠過(guò)濾層析技術(shù)。利用具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠顆粒的分子篩作用，根據(jù)分離樣品中分子量大小的差異進(jìn)行洗脫分離的一項(xiàng)技術(shù)。每一種特定的凝膠介質(zhì)都有特定的分子量分級(jí)范圍。根據(jù)其分級(jí)范圍，可以將溶質(zhì)分子分為三類(lèi)：全排阻分子、全滲透分子以及部分滲透分子。按照分子在層析凝膠中的保留時(shí)間長(zhǎng)短逐步洗脫。SephadexG加一個(gè)數(shù)字，數(shù)字越小的介質(zhì)交聯(lián)度越大，分級(jí)范圍越小，而數(shù)字越大的介質(zhì)交聯(lián)度越小，分級(jí)范圍越大。G DEAE纖維素 就是陰離子交換層析，是按照離子強(qiáng)度對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離， 離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的一種方法。 ⒈ 離子交換劑預(yù)處理和裝柱 對(duì)于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒，以保證有較好的均勻度，對(duì)于已溶脹好的產(chǎn)品則不必經(jīng)這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處理，使之成為帶H或OH的交換劑型。陰離子交換劑常用“堿酸堿”處理，使最終轉(zhuǎn)為OH型或鹽型交換劑；對(duì)于陽(yáng)離子交換劑則用“酸堿酸”處理，使最終轉(zhuǎn)為H型交換劑。洗滌好的纖維素使用前必須平衡至所需的pH和離子強(qiáng)度。已平衡的交換劑在裝柱前還要減壓除氣泡。為了避免顆粒大小不等的交換劑在自然沉降時(shí)分層，要適當(dāng)加壓裝柱，同時(shí)使柱床壓緊，減少死體積，有利于分辨率的提高。柱子裝好后再用起始緩沖液淋洗，直至達(dá)到充分平衡方可使用。 ⒉ 加樣與洗脫 加樣：層析所用的樣品應(yīng)與起始緩沖液有相同的pH和離子強(qiáng)度，所選定的pH值應(yīng)落在交換劑與被結(jié)合物有相反電荷的范圍，同時(shí)要注意離子強(qiáng)度應(yīng)低，可用透析、凝膠過(guò)濾或稀釋法達(dá)此目的。樣品中的不溶物應(yīng)在透析后或凝膠過(guò)濾前，以離心法除去。為了達(dá)到滿(mǎn)意的分離效果，上樣量要適當(dāng)，不要超過(guò)柱的負(fù)荷能力。柱的負(fù)荷能力可用交換容量來(lái)推算，通常上樣量為交換劑交換總量的1％5％。 洗脫：已結(jié)合樣品的離子交換前，可通過(guò)改變?nèi)芤旱膒H或改變離子強(qiáng)度的方法將結(jié)合物洗脫，也可同時(shí)改變pH與離子強(qiáng)度。為了使復(fù)雜的組份分離完全，往往需要逐步改變pH或離子強(qiáng)度，其中最簡(jiǎn)單的方法是階段洗脫法，即分次將不同pH與離子強(qiáng)度的溶液加入，使不同成分逐步洗脫。由于這種洗脫pH與離子強(qiáng)度的變化大，使許多洗脫體積相近的成分同時(shí)洗脫，純度較差，不適宜精細(xì)的分離。最好的洗脫方法是連續(xù)梯度洗脫，洗脫裝置見(jiàn)圖6。兩個(gè)容器放于同一水平上，第一個(gè)容器盛有一定pH的緩沖液，第二個(gè)容器含有高鹽濃度或不同pH的緩沖液，兩容器連通，第一個(gè)容器與柱相連，當(dāng)溶液由第一容器流入柱時(shí)，第二容器中的溶液就會(huì)自動(dòng)來(lái)補(bǔ)充，經(jīng)攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩沖液的洗脫能力即成梯度變化。第一容器中任何時(shí)間的濃度都可用下式進(jìn)行計(jì)算： C＝C）（ 式中A、C時(shí)為線(xiàn)性梯度，當(dāng)A＞A2時(shí)為凸形梯度。 洗脫時(shí)應(yīng)滿(mǎn)足以下要：①洗脫液體積應(yīng)足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使分離的各峰不致于太擁擠。②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質(zhì)能被洗脫下來(lái)。③梯度不要上升太快，要恰好使移動(dòng)的區(qū)帶在快到柱末端時(shí)達(dá)到解吸狀態(tài)。目的物的過(guò)早解吸，會(huì)引起區(qū)帶擴(kuò)散；而目的物的過(guò)晚解吸會(huì)使峰形過(guò)寬。 ⒊ 洗脫餾份的分析 按一定體積（5ml/管）收集的洗脫液可逐管進(jìn)行測(cè)定，得到層析圖譜。依實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌?，可采用適宜的檢測(cè)方法（生物活性測(cè)定、免疫學(xué)測(cè)定等）確定圖譜中目的物的位置，并回收目的物。 ⒋ 離子交換劑的再生與保存 離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用％NaOH水。保存離子交換劑時(shí)要加防腐劑。％氯已定（洗必泰），陽(yáng)離子交換劑可用乙基硫柳汞（％）。％疊氮鈉。 ⒌ 離子交換層析的應(yīng)用 離子交換層析技術(shù)已廣泛用于各學(xué)科領(lǐng)域。在生物化學(xué)及臨床生化檢驗(yàn)中主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。 SephadexG一般就是分離分子量差距較大的混合物質(zhì)。 替代方法可能會(huì)有超濾，也是截流分子量。HPLC高效液相色譜等分離方法，但是還是離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的一種方法。 ⒈ 離子交換劑預(yù)處理和裝柱 對(duì)于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒，以保證有較好的均勻度，對(duì)于已溶脹好的產(chǎn)品則不必經(jīng)這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處理，使之成為帶H或OH的交換劑型。陰離子交換劑常用“堿酸堿”處理，使最終轉(zhuǎn)為OH型或鹽型交換劑；對(duì)于陽(yáng)離子交換劑則用“酸堿酸”處理，使最終轉(zhuǎn)為H型交換劑。洗滌好的纖維素使用前必須平衡至所需的pH和離子強(qiáng)度。已平衡的交換劑在裝柱前還要減壓除氣泡。為了避免顆粒大小不等的交換劑在自然沉降時(shí)分層，要適當(dāng)加壓裝柱，同時(shí)使柱床壓緊，減少死體積，有利于分辨率的提高。柱子裝好后再用起始緩沖液淋洗，直至達(dá)到充分平衡方可使用。 ⒉ 加樣與洗脫 加樣：層析所用的樣品應(yīng)與起始緩沖液有相同的pH和離子強(qiáng)度，所選定的pH值應(yīng)落在交換劑與被結(jié)合物有相反電荷的范圍，同時(shí)要注意離子強(qiáng)度應(yīng)低，可用透析、凝膠過(guò)濾或稀釋法達(dá)此目的。樣品中的不溶物應(yīng)在透析后或凝膠過(guò)濾前，以離心法除去。為了達(dá)到滿(mǎn)意的分離效果，上樣量要適當(dāng)，不要超過(guò)柱的負(fù)荷能力。柱的負(fù)荷能力可用交換容量來(lái)推算，通常上樣量為交換劑交換總量的1％5％。 洗脫：已結(jié)合樣品的離子交換前，可通過(guò)改變?nèi)芤旱膒H或改變離子強(qiáng)度的方法將結(jié)合物洗脫，也可同時(shí)改變pH與離子強(qiáng)度。為了使復(fù)雜的組份分離完全，往往需要逐步改變pH或離子強(qiáng)度，其中最簡(jiǎn)單的方法是階段洗脫法，即分次將不同pH與離子強(qiáng)度的溶液加入，使不同成分逐步洗脫。由于這種洗脫pH與離子強(qiáng)度的變化大，使許多洗脫體積相近的成分同時(shí)洗脫，純度較差，不適宜精細(xì)的分離。最好的洗脫方法是連續(xù)梯度洗脫，洗脫裝置見(jiàn)圖6。兩個(gè)容器放于同一水平上，第一個(gè)容器盛有一定pH的緩沖液，第二個(gè)容器含有高鹽濃度或不同pH的緩沖液，兩容器連通，第一個(gè)容器與柱相連，當(dāng)溶液由第一容器流入柱時(shí)，第二容器中的溶液就會(huì)自動(dòng)來(lái)補(bǔ)充，經(jīng)攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩沖液的洗脫能力即成梯度變化。第一容器中任何時(shí)間的濃度都可用下式進(jìn)行計(jì)算： C＝C）（ 式中A、C時(shí)為線(xiàn)性梯度，當(dāng)A＞A2時(shí)為凸形梯度。 洗脫時(shí)應(yīng)滿(mǎn)足以下要：①洗脫液體積應(yīng)足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使分離的各峰不致于太擁擠。②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質(zhì)能被洗脫下來(lái)。③梯度不要上升太快，要恰好使移動(dòng)的區(qū)帶在快到柱末端時(shí)達(dá)到解吸狀態(tài)。目的物的過(guò)早解吸，會(huì)引起區(qū)帶擴(kuò)散；而目的物的過(guò)晚解吸會(huì)使峰形過(guò)寬。 ⒊ 洗脫餾份的分析 按一定體積（5ml/管）收集的洗脫液可逐管進(jìn)行測(cè)定，得到層析圖譜。依實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌刹捎眠m宜的檢測(cè)方法（生物活性測(cè)定、免疫學(xué)測(cè)定等）確定圖譜中目的物的位置，并回收目的物。 ⒋ 離子交換劑的再生與保存 離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用％NaOH水。保存離子交換劑時(shí)要加防腐劑。％氯已定（洗必泰），陽(yáng)離子交換劑可用乙基硫柳汞（％）。％疊氮鈉。 ⒌ 離子交換層析的應(yīng)用 離子交換層析技術(shù)已廣泛用于各學(xué)科領(lǐng)域。在生物化學(xué)及臨床生化檢驗(yàn)中主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。 替代方法也許超濾可以，但只能以此截流固定分子量。高效液相色譜，這個(gè)十分方便，但是儀器很貴，如果SephadexG等方法可以進(jìn)行分離，還是比高效液相便宜的......

3、柱層析的三，上樣方法

   上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開(kāi)劑，如果展開(kāi)劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后，再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法。 上樣完畢后，接著即用淋洗劑淋洗。淋洗劑一般采用TLC分析得到的展開(kāi)劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。由于層析柱和薄板的不同，即使兩者使用的硅膠都相同，但是在把TLC分析得到的展開(kāi)劑用在柱層析時(shí)，也顯得極性偏大，所以要稀釋一倍，但又不能稀釋太多，否則成了靠擴(kuò)散作用來(lái)分離，效果也不會(huì)好。

4、5．舉例說(shuō)明三種柱層析的原理

   在分離分析特別是蛋白質(zhì)分離分析中，層析是相當(dāng)重要、且相當(dāng)常見(jiàn)的一種技術(shù)，其原理較為復(fù)雜，對(duì)人員的要相對(duì)較高，這里只能做一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的介紹。 一、 吸附層析 、 聚酰胺薄膜層析 聚酰胺對(duì)極性物質(zhì)的吸附作用是由于它能和被分離物之間形成氫鍵。這種氫鍵的強(qiáng)弱就決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)，展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競(jìng)爭(zhēng)形成氫鍵。因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤觿┦狗蛛x在聚酰胺膜表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續(xù)過(guò)程，就能導(dǎo)致分離物質(zhì)達(dá)到分離目的。 二、 離子交換層析 離子交換層析是在以離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的系統(tǒng)中進(jìn)行的。離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團(tuán)和反離子構(gòu)成的。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應(yīng)主要以離子交換方式進(jìn)行，或借助離子交換劑上電荷基團(tuán)對(duì)溶液中離子或離子化合物的吸附作用進(jìn)行。` 三、 凝膠過(guò)濾 凝膠過(guò)濾又叫分子篩層析，其原因是凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部。當(dāng)一混合溶液通過(guò)凝膠過(guò)濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開(kāi)了。 四、 親和層析 親和層析的原理與眾所周知的抗原一抗體、激素一受體和酶一底物等特異性反應(yīng)的機(jī)理相類(lèi)似，每對(duì)反應(yīng)物之間都有一定的親和力。正如在酶與底物的反應(yīng)中，特異的廢物（S'）才能和一定的酶（E）結(jié)合，產(chǎn)生復(fù)合物（E－S'）一樣。在親和層析中是特異的配體才能和一定的生命大分子之間具有親和力，并產(chǎn)生復(fù)合物。而親和層析與酶一底物反應(yīng)不同的是，前者進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，配體（類(lèi)似底物）是固相存在；后者進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，底物呈液相存在。實(shí)質(zhì)上親和層析是把具有識(shí)別能力的配體L（對(duì)酶的配體可以是類(lèi)似底物、抑制劑或輔基等）以共價(jià)鍵的方式固化到含有活化基團(tuán)的基質(zhì)M（如活化瓊脂糖等）上，制成親和吸附劑M－L，或者叫做固相載體。而固化后的配體仍保持束縛特異物質(zhì)的能力。因此，當(dāng)把圍相載體裝人小層析柱（幾毫升到幾十毫升床體積）后，讓欲分離的樣品液通過(guò)該柱。這時(shí)樣品中對(duì)配體有親和力的物質(zhì)S就可借助靜電引力、范德瓦爾力，以及結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效應(yīng)等作用吸附到固相載體上，而無(wú)親和力或非特異吸附的物質(zhì)則被起始緩沖液洗滌出來(lái)，并形成了第一個(gè)層析峰。然后，恰當(dāng)?shù)馗淖兤鹗季彌_ 液的PH值、或增加離子強(qiáng)度、或加人抑③劑等因子，即可把物質(zhì)S從固相載體上解離下來(lái)，并形成了第M個(gè)層析峰（見(jiàn)圖、PH梯度溶液的形成 在離子交換層析中，PH梯度溶液的形成是靠梯度混合儀實(shí)現(xiàn)的。例如，當(dāng)使用陰離子 劑進(jìn)行層析時(shí)，制備PH由高到低呈線(xiàn)性變化的梯度溶液的方法是，在梯度儀的混合室（這層析柱者）中裝高PH溶液，而在另一室裝低PH極限溶液，然后開(kāi)層析柱的下端出口，讓洗脫液連續(xù)不斷地流過(guò)柱體。這時(shí)從柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低變化的。而在聚焦層析中，當(dāng)洗脫液流進(jìn)多緩沖交換劑時(shí)，由于交換劑帶具有緩沖能力的電荷基團(tuán)，故PH梯度溶液可以自動(dòng)形成。例如，當(dāng)柱中裝陰離子交換劑PBE的多緩沖劑物質(zhì)（作流動(dòng)相）的淋洗液通過(guò)柱體，這時(shí)多緩沖劑中酸性最強(qiáng)的組分與堿性陰離子交換對(duì)結(jié)合發(fā)生中和作用。隨著淋洗液的不斷加人，住內(nèi)每點(diǎn)的PH值從高到低逐漸下降。照此處理J段時(shí)間，從層析柱頂部到底部就形成了PH逐漸降至6，并最后恒定于此值，這時(shí)層析柱的PH梯度也就消失了。 2．蛋白質(zhì)的行為 蛋白質(zhì)所帶電荷取決于它的等電點(diǎn)（PI）和層析柱中的PH值。當(dāng)柱中的PH低于蛋白質(zhì)的PI時(shí)，蛋白質(zhì)帶正電荷，且不與陰離于交換劑結(jié)合。而隨著洗脫劑向前移動(dòng)，固定相中的PH值是隨著淋洗時(shí)間延長(zhǎng)而變化的。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)移動(dòng)至環(huán)境PH高于其PI時(shí)，蛋白質(zhì)由帶正電行變?yōu)閹ж?fù)電荷，并與陰離子交換劑結(jié)合。由于洗脫劑的通過(guò)，蛋白質(zhì)周?chē)沫h(huán)境PH 再次低于PI時(shí)，它又帶正電荷，并從交換劑解吸下來(lái)。隨著洗脫液向柱底的遷移，上述過(guò)程將反復(fù)進(jìn)行，于是各種蛋白質(zhì)就在各自的等電點(diǎn)被洗下來(lái)，從而達(dá)到了分離的目的。 不同蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，它們?cè)诒浑x子交換劑結(jié)合以前，移動(dòng)之距離是不同的，洗脫出來(lái)的先后次序是按等電點(diǎn)排列的。

5、小學(xué)生二年級(jí)語(yǔ)文園地七把下面的句子補(bǔ)充完整,1,見(jiàn)善則遷后面是什么

   ，把冰心自己比作紅蓮，把她母親比作荷葉，“心中的雨點(diǎn)”比喻了人生中的種種困難；：在暴風(fēng)雨之中，荷葉覆蓋在紅蓮之上，為它遮風(fēng)擋雨，代表了母親在冰心遇到困難時(shí)，安慰她、鼓勵(lì)她；，也體現(xiàn)出冰心懂得感恩的思想品德。 我這是老師講的答案，一定要哦~ 語(yǔ)文是語(yǔ)言文字、語(yǔ)言文章或語(yǔ)言文化的簡(jiǎn)稱(chēng)，其本義是語(yǔ)言文字。語(yǔ)言包括口頭語(yǔ)言和書(shū)面語(yǔ)言。口頭語(yǔ)言較隨意，直接易懂，而書(shū)面語(yǔ)言講究準(zhǔn)確和語(yǔ)法；文學(xué)包括中外古今文學(xué)等。而語(yǔ)文中的文章不但有文藝文（文學(xué)、曲藝等），還有很多實(shí)用文（應(yīng)用文）。

6、硅膠吸附柱色譜鋪一層脫脂棉為什么

   主要是其緩沖作用。 硅膠吸附柱色譜最怕的是柱子裝填的不夠均勻，從而造成溝流，導(dǎo)致分離過(guò)程中拖尾，甚至失去分離效果。 色譜柱物料和流動(dòng)相滴加過(guò)程中，由于物料滴下去的能量，會(huì)導(dǎo)致局部填料裝填密度增加，使物料和流動(dòng)相局部流速降低，從而造成拖尾。通過(guò)增加一層脫脂棉，使物料和流動(dòng)相滴加到脫脂棉上，從而起到非常好的緩沖作用，避免出現(xiàn)上述狀況，從而達(dá)到良好的分離效果。 樣品進(jìn)入色譜柱中,吸附在單位厚度的一層填料上，假設(shè)你有一長(zhǎng)一短兩根色譜柱，在填料相同柱直徑相同的情況下這一層吸附了樣品的填料是厚度大致是一樣的，那長(zhǎng)的柱子是不是有更多的這樣的一層填料？所以總的柱效上去了，但相對(duì)于每一米的柱效還是一樣的。樓上的回答中長(zhǎng)柱子保留時(shí)間會(huì)增加這是肯定的，但峰會(huì)變寬個(gè)人認(rèn)為不是這樣的，峰的寬度與填料的吸符能力或進(jìn)樣量有關(guān)，也就是說(shuō)吸附了樣品的這層填料的厚度。越厚則從剛開(kāi)始有響應(yīng)值到響應(yīng)值結(jié)束的時(shí)間越長(zhǎng)，峰的寬越大。